怎么使Waters ACQUITY BEH色譜柱保持良好的性能？
為確保Waters ACQUITY BEH色譜柱始終保持理想性能，請遵循以下原則：
a. 樣品前處理
1. 樣品中的雜質(zhì)往往會污染色譜柱。避免污染的方法之一是在分析之前使用填充有適合填料的Waters Oasis?固相萃取小柱/色譜柱或Sep-Pak?小柱凈化樣品。
2. 為獲得理想峰形和靈敏度，優(yōu)先選用運(yùn)行分析時(shí)擬用的流動相或比它更弱的流動相來制備樣品。除非安裝了正己烷/四氫呋喃兼容性配件包，否則切勿將丙酮用作樣品溶劑/稀釋劑。
3. 如果樣品不溶于流動相，請確保樣品、溶劑和流動相可以混溶，以避免樣品和/或緩沖鹽析出。
4. 用0.2μm濾膜過濾樣品，去除顆粒物質(zhì)。如果用于溶解樣品的溶劑含有機(jī)溶劑（如乙腈、甲醇等），請確保濾膜材料不溶于該溶劑。請聯(lián)系濾膜生產(chǎn)商了解濾膜的溶劑兼容性。或者，可以考慮在8000 rpm下離心樣品溶液20 min，然后將上清液轉(zhuǎn)移至適當(dāng)?shù)臉悠菲恐小?/span>
5. 對于親水作用色譜(HILIC)分離，樣品必須用高百分比的有機(jī)溶劑制備（例如95%乙腈）。請參閱相關(guān)章節(jié)。
b. pH范圍
ACQUITY BEH色譜柱的推薦操作pH范圍如下：采用BEH
C18、BEH C8和BEH苯基填料為1~12；采用BEH Shield RP18和BEHAmide填料為2~11；采用BEH HILIC填料為1~9。表2列出了常用的緩沖鹽和添加劑。此外，柱壽命將根據(jù)操作溫度、使用的緩沖鹽類型和濃度而有所不同。例如，在高溫下使用pH值為8的磷酸鹽緩沖液會縮短色譜柱壽命。
c. 溶劑
為了保持理想的色譜柱性能，請使用高品質(zhì)色譜級溶劑。所有水相緩沖鹽在使用前都應(yīng)使用0.2 μm濾膜過濾。推薦使用PallGelman Laboratory Acrodisc®過濾器。含有懸浮顆粒物的溶劑
通常會堵塞色譜柱入口篩板，這會導(dǎo)致操作壓力增大，性能變差。有關(guān)詳細(xì)信息，請參閱相關(guān)章節(jié)。
d. 壓力
ACQUITY BEH色譜柱能夠承受高達(dá)18000psi（1241 bar或124 MPa）的操作壓力。
注：在壓力、pH和/或溫度的極值下運(yùn)行會縮短色譜柱使用壽命。
e. 溫度
為了改善選擇性、降低溶劑粘度和提高傳質(zhì)速率，ACQUITYBEH色譜柱的推薦操作溫度范圍為20 °C~90 °C。在高pH條件下操作時(shí)，建議降低操作溫度以延長色譜柱使用壽命。在較高
溫度下（如70 °C以上）運(yùn)行也可能縮短色譜柱使用壽命。在HILIC分析中，BEH Amide色譜柱可以在高pH值和高溫條件下使用，不會出現(xiàn)問題（請參閱“BEH Amide色譜柱入門”章節(jié)的推薦條件）。
表2.使用ACQUITY BEH色譜柱時(shí)的推薦緩沖鹽
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添加劑/緩沖液
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pK,
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緩沖液范圍
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揮發(fā)性(±1個pH單位)
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能否用于質(zhì)譜
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注釋
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TFA
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0.3
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—
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揮發(fā)性
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可用
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離子對添加劑，能抑制MS信號，
在0.02%~0.1%范圍內(nèi)使用。
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乙酸
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4.76
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—
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揮發(fā)性
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可用
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與醋酸銨-起使用時(shí)緩沖能力非常強(qiáng)。
在0.1%~1.0%范圍內(nèi)使用。
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醋酸鹽(NH3 CH3CO2)
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3.75
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—
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揮發(fā)性
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可用
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與甲酸銨-起使用時(shí)緩沖能力非常強(qiáng)。
在0.1%~ 1.0%范圍內(nèi)使用。
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甲酸鹽(NH4HCO2)
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4.76
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3.76-5.76
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揮發(fā)性
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可用
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在1~10 mM范圍內(nèi)使用。
注:其鈉鹽或鉀鹽無揮發(fā)性。
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磷酸鹽1
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3.75
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2.75-4.75
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揮發(fā)性
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可用
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在1~10 mM范圍內(nèi)使用。
注:其鈉鹽或鉀鹽無揮發(fā)性。
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磷酸鹽2
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2.15
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1.15-3.15
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非揮發(fā)性
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不可用
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常用的低pH緩沖液，具有良好的UV透光性。
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磷酸鹽3
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7.2
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6.20-8.20
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非揮發(fā)性
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不可用
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pH值大于7時(shí)，需要降低柱溫/濃度并使用保護(hù)柱，以便盡可能延長使用壽命。
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4-甲基嗎（ma）啡啉
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12.3
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11.3-13.3
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非揮發(fā)性
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不可用
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pH值大于7時(shí)，需要降低柱溫/濃度并使用保護(hù)柱，以便盡可能延長使用壽命。
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氨水(NH4OH)
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~8.4
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7.4-9.4
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揮發(fā)性
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可用
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通常在10mM或更低濃度下使用。
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碳酸氫銨
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9.2
10.3(HCO3-)
9.2
(NH4+)
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8.2-10.2
8.2-11.3
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揮發(fā)性
揮發(fā)性
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可用
可用
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在5~10mM范圍內(nèi)使用(進(jìn)行MS分析時(shí)，需保持源溫度> 150°C)。用氨水或醋酸調(diào)節(jié)pH值。pH=10時(shí)具有良好的緩沖容量。
注:請使用碳酸氫銨(NH,HCO),而不是碳酸銨(INH4)2CO3)。
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醋酸銨
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9.2
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8.2-10.2
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揮發(fā)性
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可用
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在1~10 mM范圍內(nèi)使用。
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甲酸銨
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9.2
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8.2-10.2
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揮發(fā)性
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可用
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在1~10 mM范圍內(nèi)使用。
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硼酸鹽
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9.2
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8.2-10.2
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非揮發(fā)性
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不可用
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需要降低柱溫/濃度并使用保護(hù)柱，以便盡可能延長使用壽命。
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CAPSO
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9.7
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8.7-10.7
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非揮發(fā)性
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不可用
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兩性離子緩沖液，兼容乙腈，在1~10 mM范圍內(nèi)使用。氣味小。
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甘氨酸
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2.4,
9.8
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8.8-10.8
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非揮發(fā)性
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不可用
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兩性離子緩沖液，相較于硼酸鹽緩沖液更有助于延長色譜柱壽命。
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1-甲基哌（pai）啶
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10.2
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9.3-11.3
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揮發(fā)性
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可用
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在1~10 mM范圍內(nèi)使用。
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CAPS
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10.4
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9.5-11.5
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非揮發(fā)性
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不可用
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兩性離子緩沖液，兼容乙腈，在1~10mM范圍內(nèi)使用。氣味小。
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三乙胺(用作醋酸鹽)
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10.7
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9.7-11.7
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揮發(fā)性
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可用
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在0.1%~1.0%范圍內(nèi)使用。僅當(dāng)使用乙酸滴定時(shí)具有揮發(fā)性(使用鹽酸或磷酸滴定時(shí)無揮發(fā)性)。在DNA分析(pH 7~9)中用作離子對試劑。
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吡咯烷
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11.3
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10.3-12.3
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揮發(fā)性
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可用
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溫和型緩沖液，可延長柱壽命。
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注：在pH、溫度和/或壓力的極值下運(yùn)行會縮短色譜柱使用壽命。
