一、實驗目的

本法為以SimplyGreen HLB(60mg/3mL)柱開發的針對動物源食品(豬肉、牛肉、雞肉、豬肝和水產品)中硝基呋喃類代謝物殘留檢測的樣本前處理凈化方法，HPLC法作為檢測手段。SimplyGreen HLB(60mg/3mL)柱凈化效果良好，回收率滿足測試要求，重現性好，與知名廠商同型號柱性能相當。

二、實驗目標物

土霉素(CAS:79-57-2)，四環素(CAS:60-54-8)，金霉素(CAS:57-62-5)，強力霉素(CAS:564-25-0)

三、應用范圍

本方法適用于動物源性食品中四環素類藥物多殘留的HPLC檢測及確證。

四、參考標準

《GB/T 21317-2007 食品安全國家標準  動物源性食品中四環素類獸藥殘留量 高效液相色譜法》。

五、實驗材料

SimplyGreen HLB(60mg/3mL)

六、實驗方法

1、樣品提取

稱取混勻牛奶試樣5 g(精確到0.01 g)，置于50 mL離心管中，用0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine 緩沖液溶解并定容至50 mL，漩渦混合1 min，冰水浴超聲10 min，轉移至50 mL離心管中，冷卻至0 ℃-4 ℃，5000 r/min離心10min(溫度低于15 ℃)，用快速濾紙過濾待凈化。

2、SPE柱凈化

(1)活化：HLB柱依次用5 mL甲醇和5 mL水活化。
(2)上樣和洗脫：準確吸取10 mL備用液過HLB固相萃取柱，待樣液全部流出后，依次用5 mL水和5 mL甲醇水（1:9，v/v）淋洗，棄去全部流出液。2.0kPa以下減壓抽干5 min，然后用10 mL甲醇-乙酸乙酯(5:95, v/v)洗脫，收集洗脫液。
(3)重新溶解：洗脫液于40 ℃氮氣吹干，加10 mmol/L三氟乙酸水溶液1.0 mL溶解殘余物，濾膜過濾，供高效液相色譜測定。

3、HPLC條件

設備：Waters Alliance 2695
檢測器：Waters 2487 雙波長檢測器；檢測波長：268nm
色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm)
流動相：A:乙腈      B:10 mmol/L三氟甲酸水溶液
洗脫方式：梯度洗脫
表1 洗脫梯度條件

流速：1 mL/min
柱溫：室溫
進樣體積:20μL

七、實驗結果

1、0.8mg/kg牛奶基質中四環素的添加回收結果
表2 0.8mg/kg牛奶基質中四環素的添加回收結果